醫(yī)學論文：雷公藤多甙對大鼠卵泡發(fā)育及其旁分泌調(diào)控機制的影響

基金項目：河北省中醫(yī)藥管理局科研項目“補腎調(diào)沖方對卵巢早衰的影響及機制”，課題編號：200411027
通訊作者：董江川，dongjiangchuan@yahoo.com.cn，13436012689

雷公藤多甙對大鼠卵泡發(fā)育及其旁分泌調(diào)控機制的影響
楊涓1 高慧2 韓冰3 董江川4
(1.重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院，重慶市 400016，2.承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院，承德市 067000，3.天津中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院，天津市300150，4.重慶醫(yī)科大學中醫(yī)藥學院，重慶市 401331）

摘 要 目的：研究雷公藤多甙（GTW）對大鼠卵泡發(fā)育及其旁分泌調(diào)控機制的影響。方法：給于SD雌性大鼠不同劑量GTW灌胃28d后，采用光、電鏡觀察大鼠卵巢組織結(jié)構(gòu)、進行各級卵泡及黃體數(shù)比較，采用實時熒光定量PCR法測定卵巢組織卵泡刺激素受體（FSHR）、表皮生長因子（EGF）及縫隙連接蛋白43（C*43）的mRNA表達。結(jié)果：各劑量雷公藤組小卵泡均明顯減少（P＜0.01或P＜0.05），雷公藤③、④、⑤組中、大卵泡及黃體有明顯減少（P＜0.01或P＜0.05），與藥物劑量呈負相關(guān)。各劑量雷公藤對卵泡超微結(jié)構(gòu)均有不同程度損害。各雷公藤組FSHR mRNA表達無顯著降低，但EGF 及C*43 mRNA表達顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），與藥物劑量呈負相關(guān)。結(jié)論 GTW可導(dǎo)致
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and C*43 in the ovary were detected by real-time PCR. RESULTS：In each GTW groups, little follicles were decreased significantly（P＜0.01或P＜0.05）.The middle and big follicles were decreased significantly，negative correlation with the dose of GTW in GTW group③, GTW group④ and GTW group⑤（P＜0.01或P＜0.05）.In each GTW group，the ovary ultrastructure was damaged obviously，positive correlation with the dose of GTW.The e*press of FSHR mRNA was not declined obviously in each GTW grous, but the e*press of EGF and C*43 FSHR mRNA was declined markedly which were negative correlation with dose of GTW（P＜0.01或P＜0.05）. CONCLUSIONS：The possible mechanism of GTW-induced ovary structure damage, ovarian reserve reduce and follicular obstacles caused was to restrain EGF and C*43.

Key Word：Glycosides of Tripterygium wilfordii Hook. f （GTW）；follicle；Follicle stimulating hormone receptor（FSHR）；Epidermal growth factor（EGF）；Conne*in43（C*43）

雷公藤多甙（Glycosides of Tripterygium wilfordii Hook. f，GTW）是臨床應(yīng)用最廣泛的雷公藤制劑，具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗腫瘤等藥理作用。部分自身免疫性疾病女性患者服藥后發(fā)生月經(jīng)紊亂和閉經(jīng)，故成為卵巢早衰的醫(yī)源性因素之一[1]。既往研究顯示，GTW對生殖功能具有抑制作用，表現(xiàn)為月經(jīng)周期延長、閉經(jīng)、血漿雌二醇（E2）水平下降，卵泡雌激素（FSH）升高，故認為其作用靶點在卵巢[2]，而對其生殖毒理的研究則以細胞凋亡為主要研究方向[3]，未見雷公藤對卵泡發(fā)育調(diào)控因子影響的研究報道。本研究通過對大鼠卵巢結(jié)構(gòu)觀察及各級卵泡計數(shù)比較研究雷公藤多甙對各發(fā)育階段卵泡的影響，并通過對旁分泌調(diào)控因子FSHR、EGF及C*43 mRNA表達的觀察來研究GTW對卵泡發(fā)育調(diào)控機制的影響，探討其生殖毒理機制。

1 儀器與材料
1.1 儀器
PMr10AD型倒置相差顯微鏡（日本OLYMPUS公司）；JEM-1010透射電鏡儀（日本電子公司）；SYD-K2030型冷凍病理切片機（沈陽譽德電子儀器有限公司）；熒光定量PCR儀（瑞士羅氏公司）。
1.2 試藥
雷公藤多甙片（湖南協(xié)力藥業(yè)有限公司，批號：20050402）；多聚甲醛固定液，戊二醛固定液；Trizol RNA提取試劑（Invitrogen公司生產(chǎn)，批號：15596026）；LightCycle SYBR Green I RNA一步法擴增試劑盒和LightCycle質(zhì)控盒（德國Roche公司）。
1.3 動物
12周齡，SPF級SD大鼠，♀，體重260±10g，由北京大學醫(yī)學部實驗動物部提供（許可證號：SC*K(京)2002-0001）。每日行陰道脫落細胞涂片，凡間隔4～5d出現(xiàn)兩次動情期者納入實驗；
2 方法
2.1 分組及給藥
將大鼠隨機分為正常組及GTW①（5mg•kg -1•d-1）GTW②（10mg•kg -1•d-1）、GTW③（20mg•kg -1•d-1）、GTW④（50mg•kg -1•d-1）、GTW⑤組（75mg•kg -1•d-1），10只/組。除正常組外均予上述劑量胃雷公藤多甙片水溶液ig ，共28d，次日處死大鼠進行以下項目觀察。
2.2 組織學觀察
切取的卵巢組織用4%多聚甲醛固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋、連續(xù)5µm切片后蘇木精－伊紅（HE）染色、封片，取最大剖面切片光鏡下觀察，并計數(shù)具有正常結(jié)構(gòu)的各級卵泡數(shù)、卵泡總數(shù)及黃體數(shù)。卵泡分級方法參考文獻[4,5]：小卵泡直徑<30µ ……（未完，全文共9811字，當前僅顯示2680字，請閱讀下面提示信息。收藏《醫(yī)學論文：雷公藤多甙對大鼠卵泡發(fā)育及其旁分泌調(diào)控機制的影響》）