論文開題：葉酸偶聯(lián)HTCC的合成及其基因載體初步研究

大學本科畢業(yè)論文(設計)開題報告
學院：材料科學與工程學院　　　　　　　　　　　　　專業(yè)班級:2008級高分子材料與工程2班

課題名稱 葉酸偶聯(lián)HTCC的合成及其基因載體初步研究

1、本課題的的研究目的和意義：
殼聚糖是天然存在的陽離子多糖，具有無毒、生物相容性好和可生物降解性等特點。季銨化殼聚糖是一種可溶性的殼聚糖衍生物，季銨基團的引入可明顯增加殼聚糖的溶解性。葉酸可與腫瘤細胞表面大量表達的葉酸受體特異性地結合，將葉酸接枝于殼聚糖上可增加產(chǎn)物的靶向性。通過本課題的研究以期獲得一種具有潛在研究和應用價值的新型殼聚糖基非病毒基因載體。
2、文獻綜述（國內(nèi)外研究情況及其發(fā)展）：
殼聚糖作為一種具有天然優(yōu)良性能的生物材料，可廣泛應用于醫(yī)藥、環(huán)保、化工等領域。特別是近年來，隨著高分子科學和生物醫(yī)學工程的發(fā)展，殼聚糖在醫(yī)學方面的研究和應用日益增多，已被視為人體的“第六生命要素”。 追溯到1995年，Mislick等[1]制備了葉酸-聚賴氨酸/DNA復合物作為溶菌酶基
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N-季銨化殼聚糖與DNA復合，并對復合物進行表征測試，來初步研究對葉酸偶聯(lián)N-季銨化殼聚糖作為基因載體的優(yōu)越性。
成果形式：
(1) 制備目標產(chǎn)物葉酸偶聯(lián)N-(2-羥丙基)-3-甲基氯化銨殼聚糖(FA-HTCC)。
(2) 通過水溶性試驗測定HTCC和FA-HTCC的水溶性；通過溶解性試驗測定產(chǎn)物的溶解性。用紅外和核磁等手段對其進行表征，通過對合成條件的優(yōu)化，在較優(yōu)條件下合成HTCC，F(xiàn)A-HTCC并對其水溶性進行分析及檢測其作為基因載體的優(yōu)越性。
(3)分析不同N/P的FA-HTCC/DNA復合物的粒徑與Zeta電位。檢測葉酸偶聯(lián)殼聚糖納米粒基因治療載體的優(yōu)劣。
4、 擬解決的關鍵問題：
（1）該實驗反應時間較長，注意控制反應時間，防止反應過短或過長影響產(chǎn)物的取代度。
（2）在制備FA-HTCC的過程中如何能夠更好地在N2保護下避光反應。
（3）在制備不同N/P的FA-HTCC/DNA復合物的粒徑時注意控制質粒DNA的提取及如何控制復合物的濃度配比。
5、研究思路、方法和步驟：
研究思路：
制備目標產(chǎn)物FA-HTCC，用紅外和核磁等手段對目標產(chǎn)物進行表征，檢測產(chǎn)物的水溶性、溶解性，最后通過顯微鏡定性觀察，比較葉酸偶聯(lián)殼聚糖納米粒作為基因治療載體的優(yōu)劣。
方法：
通過季銨化改性得到HTCC，再通過接枝作用制得FA-HTCC。對HTCC和FA-HTCC進行表征分析。然后制備葉酸偶聯(lián)N-季銨化殼聚糖與DNA復合物，比較葉酸偶聯(lián)殼聚糖納米粒和殼聚糖納米粒作為基因治療載體的優(yōu)劣。
步驟：
(1) 在酸性條件下，以2,3-環(huán)氧丙基三甲基氯化銨(ETA)和殼聚糖為原料，合成出具有良好水溶性、帶有正電荷殼聚糖衍生物HTCC。然后以HTCC為原料接枝葉酸基團，得到葉酸偶聯(lián)N-(2-羥丙基)-3-甲基氯化銨殼聚糖(FA-HTCC)。并對HTCC和FA-HTCC進行結構表征分析。
(2) 通過將葉酸偶聯(lián)N-季銨化殼聚糖與DNA復合，并對復合物進行表征測試。通過粒徑與Zeta電位的測定、原子力顯微鏡觀察比較不同N/P的FA-HTCC/DNA復合物的粒徑，來初步研究對葉酸偶聯(lián)N-季銨化殼聚糖作為基因載體的優(yōu)越性。
6、本課題的進度安排：
(1) 2012年2月--12年4月：
葉酸偶聯(lián)N-季銨化殼聚糖的合成
(2) 2011年4月--12年5月：
樣品表征，及作為基因載體優(yōu)劣性能的初步研究
(3) 2012年5月--12年6月：
整理和補充實驗數(shù)據(jù)，撰寫實驗論文，制作PPT，準備答辯
7、參考文獻：
[1] Mislick K A., Baldeschwieler J D., Kayyem J F., et al. Transfection folate-polylysine DNA comple*es: evidence for lysosomal delivery[J]. Bioconjugate Chemistry, 1995, 6 (5): 512-515.
[2] Lee R J, Huang L. Folate-targeted anionic liposome-entrapped polylysine- condensed DNA for tumor cell-specific gene transfer[J]. Journal of Biological Chemistry, 1996, 271: 8481-8487.
[3] Lee R J, Huang L. Lipidic vector systems for gene tran ……（未完，全文共3920字，當前僅顯示1980字，請閱讀下面提示信息。收藏《論文開題：葉酸偶聯(lián)HTCC的合成及其基因載體初步研究》）