論文開(kāi)題：米曲霉為宿主菌的基因高效轉(zhuǎn)化系統(tǒng)建立

大學(xué)本科畢業(yè)論文(設(shè)計(jì))開(kāi)題報(bào)告
學(xué)院：化工學(xué)院　　　　　　　　　　　　　專(zhuān)業(yè)班級(jí)：08生物工程1班　

課題名稱(chēng) 米曲霉為宿主菌的基因高效轉(zhuǎn)化系統(tǒng)建立

1、本課題的的研究目的和意義：

絲狀真菌中的米曲霉生長(zhǎng)迅速、易于培養(yǎng)、有著很高的蛋白分泌能力，且又是公認(rèn)的食品安全生產(chǎn)菌株，發(fā)酵及后處理技術(shù)成熟，是我國(guó)重要的微生物資源。故經(jīng)過(guò)一定的改良，其可構(gòu)建使目的基因高效表達(dá)的米曲霉代謝工程菌。
CaCl2-PEG介導(dǎo)原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法是絲狀真菌最常用的轉(zhuǎn)化方法，其中原生質(zhì)體的制備率和再生率會(huì)直接影響進(jìn)一步的基因轉(zhuǎn)化效果。本實(shí)驗(yàn)課題研究和優(yōu)化米曲霉原生質(zhì)體形成以及細(xì)胞壁再生的條件，以提高米曲霉基因轉(zhuǎn)化效率，為進(jìn)一步的基因改造工作奠定基礎(chǔ)。

2、 文獻(xiàn)綜述（國(guó)內(nèi)外研究情
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為困難，所以這方面研究的深度和廣度，比菌絲分離原生質(zhì)體有較大的差距[6]。
國(guó)內(nèi)米曲霉原生質(zhì)_備研究中主要采取了單因素法和正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法，在已有的最佳米曲霉原生質(zhì)_備的條件下[7]，本課題以探究菌齡[8],酶解溫度、酶解時(shí)間、酶液濃度、酶體系[9][10]，菌絲預(yù)處理方式、再生培養(yǎng)方式[11][12]等條件對(duì)米曲霉原生質(zhì)_備的影響。本課題將綜合各種文獻(xiàn)并在實(shí)際實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，探究和完善米曲霉原生質(zhì)_備的方法，為進(jìn)一步的基因改造工作奠定基礎(chǔ)。

3、 本課題的主要研究?jī)?nèi)容（提綱）和成果形式：
本課題以米曲霉分生孢子為對(duì)象制備原生質(zhì)體，對(duì)影響原生質(zhì)_備和再生的條件，包括培養(yǎng)條件、菌齡、酶解溫度、酶解時(shí)間、酶液濃度，菌絲預(yù)處理、再生培養(yǎng)基等進(jìn)行研究，確定制備米曲霉原生質(zhì)體的最優(yōu)化條件，為構(gòu)建高效轉(zhuǎn)化系統(tǒng)奠定基礎(chǔ)。 米曲霉制備原生質(zhì)體，有兩種基本方式：一種是利用米曲霉菌絲_備；另一種是利用米曲霉孢子制備。本課題中除了分別對(duì)兩種方法做出制備條件探索外，還會(huì)進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，以更加完善米曲霉原生質(zhì)_備的條件優(yōu)化。
本課題致力于米曲霉原生質(zhì)_備研究，主要的成果展示為米曲霉菌株展示，其中包含了一些實(shí)驗(yàn)測(cè)的的數(shù)據(jù)以及和國(guó)內(nèi)研究情況的對(duì)比分析。最終的成果主要以實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和實(shí)物圖來(lái)組合展示，已提供直接的學(xué)習(xí)、研究材料，以備今后做進(jìn)一步的探究。

4、擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題：

1.米曲霉分生孢子制備原生質(zhì)體比菌絲更困難，如何順利完成其原生質(zhì)_備；
2.優(yōu)化原生質(zhì)_備方法，提高制備率和再生率，以最終提高轉(zhuǎn)化效率。

5、研究思路、方法和步驟：

研究思路和步驟：
1、平板法培養(yǎng)米曲霉菌株P(guān)-5；
2、蝸牛酶+纖維素酶混合酶液，對(duì)P-5作用制備原生質(zhì)體，此處進(jìn)行多項(xiàng)單因素探究實(shí)驗(yàn)；
3、在探究各種單因素的變化對(duì)米曲霉原生質(zhì)_備的影響時(shí)，主要通過(guò)顯微鏡原生質(zhì)體觀察計(jì)數(shù)法來(lái)計(jì)算原生質(zhì)_備率，表征各因素最佳值；
4、在各種相關(guān)因素探究完成后，進(jìn)行組合實(shí)驗(yàn)法，控制各種因素的最佳值進(jìn)行原生質(zhì)體再生，計(jì)算制備率和再生率。
原生質(zhì)_備率 ＝（A-C）/A*100%
原生質(zhì)體的再生率＝[(B-C)/(A-C)]*100%
備注：A為對(duì)照菌液再生菌落數(shù)
B為制備得原生質(zhì)體在高滲培養(yǎng)基生長(zhǎng)菌落數(shù)
C為原生質(zhì)體在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)。

主要的研究方法：
1、本課題中，經(jīng)過(guò)對(duì)相關(guān)的文獻(xiàn)閱讀和一定的實(shí)驗(yàn)比較，建立了米曲霉玻璃紙平板培養(yǎng)法的實(shí)際操作體系；
2、本課題中對(duì)原生質(zhì)體的破壁，采用了蝸牛酶+纖維素酶混合酶液酶解法；
3、本課題中需要探究相關(guān)條件對(duì)米曲霉原生質(zhì)_備的影響，故采取了單因素法以及多因素組合法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，以探索優(yōu)化條件；
4、本實(shí)驗(yàn)中，采取了兩種實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示的方法：第 ……（未完，全文共3056字，當(dāng)前僅顯示1543字，請(qǐng)閱讀下面提示信息。收藏《論文開(kāi)題：米曲霉為宿主菌的基因高效轉(zhuǎn)化系統(tǒng)建立》）