論文開(kāi)題報(bào)告：橄欖葉中生物活性天然產(chǎn)物的分離與檢測(cè)

大學(xué)本科畢業(yè)論文(設(shè)計(jì))開(kāi)題報(bào)告
學(xué)院：　化工學(xué)院　　　　　　　專(zhuān)業(yè)班級(jí)：　2009級(jí)生物技術(shù)一班
課題名稱(chēng) 橄欖葉中生物活性天然產(chǎn)物的分離與檢測(cè)

1、本課題的的研究目的和意義：
從橄欖葉中提取多酚類(lèi)生物活性物質(zhì)一直是研究重點(diǎn)。本課題的研究重點(diǎn)是從橄欖葉中分離提取到橄欖苦甙化合物。橄欖苦苷具有抗氧化、抗真菌、抗炎、抗病毒、預(yù)防冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化、舒緩血管平滑肌、抗氧化、抗癌和降血糖等多種藥理作用。目前的分離技術(shù)主要有超臨界萃取法，索氏提取法和微波提取法。我們的想法則是運(yùn)用廉價(jià)的離子樹(shù)脂法來(lái)分離得到天然產(chǎn)物橄欖苦苷以及檢測(cè)相關(guān)產(chǎn)物活性。

2、 文獻(xiàn)綜述（國(guó)內(nèi)外研究情況及其發(fā)展）：
國(guó)外關(guān)于油橄欖的研究已從有效成分的分離及結(jié)構(gòu)鑒定轉(zhuǎn)化為對(duì)其生物活性及其中有效成分含量變化規(guī)律的研究。國(guó)內(nèi)研究?jī)H限予用油橄欖果榨取橄欖油，油橄欖的其
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)3一NaOH體系顯色后于510nm處可測(cè)得油橄欖葉總黃酮和橄欖苦苷的吸光度之和；而以AlCl3體系顯色后于415nm處僅測(cè)得總黃酮的吸光度，橄欖苦苷無(wú)吸收。利片橄欖苦苷在兩種顯色體系中的吸收特性差別，通過(guò)差減法換算后可間接測(cè)定樣品中橄欖苦苷的含量。以UV—Vis差減法測(cè)得油橄欖葉及其純化浸膏中橄欖苦苷的平均含量分別為11.6％和63.4％，3次測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為1.5％和1.2％，其結(jié)果與高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)誤差小于4％。該方法可替代HPLC用于油橄欖葉中橄欖苦苷的含量測(cè)定，為油橄欖葉及其制品的質(zhì)量控制提供了一種快速、簡(jiǎn)便、成本低廉的分析方法。


3、 本課題的主要研究?jī)?nèi)容（提綱）和成果形式：
本課題從分離測(cè)定方面入手，主要研究使用何種廉價(jià)的大孔樹(shù)脂來(lái)吸附純化橄欖苦苷的初提物，繼而研究吸附純化當(dāng)中的各種影響要素，如吸附時(shí)間，解吸液的濃度，上樣量的質(zhì)量濃度以及洗脫劑用量等對(duì)純化效果的影響。選其最優(yōu)要素對(duì)初提物的純化，再用事先研究的光度法測(cè)定其橄欖苦苷的含量。通過(guò)大孔純化的初提物中的橄欖苦苷的含量明顯提高，繼而用葡聚糖凝膠進(jìn)一步的純化，使橄欖苦苷的純度再一次的提升，等于說(shuō)其活性進(jìn)一步得到了提升，再用光度法測(cè)其橄欖苦苷的含量。


成果形式以最后得到的產(chǎn)物、硅膠薄層點(diǎn)板的樣板、畢業(yè)論文的形式呈現(xiàn)。



4、擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題：
如何再現(xiàn)應(yīng)用光度法測(cè)定橄欖苦苷的含量
如何用硅膠薄層點(diǎn)板判斷梯度洗脫的終點(diǎn)



5、研究思路、方法和步驟：
本課題從橄欖苦苷等多酚類(lèi)物質(zhì)的理化性質(zhì)，分子量大小和極性等方面著手從橄欖葉中來(lái)分離純化橄欖苦苷，其間最重要的一環(huán)則是用簡(jiǎn)易的光度法測(cè)量橄欖苦苷的純度來(lái)代替繁瑣的高效液相色譜檢測(cè)方法。

具體方法：
①首先利用橄欖苦苷的溶解性質(zhì)（易溶于甲醇）對(duì)橄欖苦苷進(jìn)行初步提取，將樹(shù)葉浸泡于甲醇中10天左右，反復(fù)浸泡樹(shù)葉約2到3次，周期為10天左右。
②將上述初提物取部分用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將初提物蒸干，測(cè)其質(zhì)量。再用蒸餾水溶解，取適當(dāng)溶解液在大孔樹(shù)脂中上樣，待其完全吸附約5h，再用不同梯度的甲醇（0%，10%，20%，40%，60%，100%）進(jìn)行洗脫，洗脫劑量按硅膠點(diǎn)板定量。洗脫時(shí)須用不同錐形瓶收取洗脫液。
③用硅膠薄層點(diǎn)板進(jìn)行點(diǎn)樣，樣品為錐形瓶?jī)?nèi)洗脫液，用此方法合并相同梯度內(nèi)的不同錐形瓶?jī)?nèi)的洗脫液。用光度法進(jìn)行檢測(cè)含量，確定含量最高的那個(gè)錐形瓶。
④將含量最高的錐形瓶?jī)?nèi)的洗脫液蒸干稱(chēng)重，加蒸餾水溶解，用葡聚糖凝膠柱層析進(jìn)行再次純化，用上述相同方法進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，再次點(diǎn)板，用光度法進(jìn)行檢測(cè)，確定最終純化的效果。
⑤后續(xù)工作為用高效液相色譜再次檢測(cè)，還有就是進(jìn)行一些測(cè)定活性方面的工作。





6、本課題的進(jìn)度安排：
2012.11-2012.12 采集5kg的橄欖樹(shù)葉作為原料并將原料磨碎浸泡于工業(yè)甲醇中，浸泡時(shí)間半個(gè)月。
2012.12-2013.1 將小部分初提物于葡聚糖凝膠進(jìn)行過(guò)柱分離并用梯度洗脫方法進(jìn)行洗脫。
2013.3-20 ……（未完，全文共3337字，當(dāng)前僅顯示1686字，請(qǐng)閱讀下面提示信息。收藏《論文開(kāi)題報(bào)告：橄欖葉中生物活性天然產(chǎn)物的分離與檢測(cè)》）